實驗室培育細胞如何無菌操作? 實驗室前期的準備工作一定要到位,先估計此次試驗過程中會使用到那些設備或者儀器,避免因估計不足、準備不充分而導致試驗不能繼續(xù)完整下去。
1. 無菌操作辦公地區(qū)范圍應維持保潔及寬闊,*東西,例如玻璃管架、吸管、汲取器或吸管盒等可以短時間之內安放,其他實驗用品用完即應移出,以利于氣流之流通。實驗用品以70 ethanol 揩拭后才帶入無菌操作臺內。實驗操作應在臺面的中央無菌地區(qū)范圍,勿在邊緣的非無菌地區(qū)范圍培養(yǎng)箱KLYQ操作。 2. 實驗施行前,無菌室及無菌操作臺(laminar flow) 以紫外燈映射30-60 分鐘滅菌,以70 ethanol 揩拭無菌操作臺面,并開啟無菌操作颶風扇運轉10 分鐘后,才著手實驗操作。每每操作只處置一株細胞株,且縱然營養(yǎng)物質相同亦不共享營養(yǎng)物質,以防止差錯淆惑或細胞間污染。實驗完結后,將實驗東西帶出辦公臺,以70 ethanol 揩拭無菌操作臺面。操作間隔應讓無菌操作臺運轉10分鐘以上后,運用霉菌培養(yǎng)箱或二氧化碳培養(yǎng)箱再施行下一個細胞株的操作。 3. 謹慎取用無菌的實驗東西,防止導致污染。勿碰觸吸管尖頭部或器皿瓶口,亦不要在敞開的器皿正上方操作實驗。器皿敞開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾側約45° 角取用,盡力勿將瓶蓋蓋口朝上安放桌面兒。 4. 辦公擔任職務的人應注意自身的安全,須穿戴實驗衣及手套兒后才施行實驗。對于來自人的總稱或是病毒感染的細胞株應尤其謹慎操作,并挑選合適等級的無菌操作臺(至少Class II)。操作過程中,應防止引動aerosol 的萌生,謹慎毒性藥品,例如DMSO 及TPA 等,并防止尖銳針頭的損害等。
5. 定期檢驗測定下面所開列項目:
a. CO2 鋼瓶的CO2 壓力
b. 二氧化碳培養(yǎng)箱的CO2 液體濃度、溫度、及水盤是否有污染(水盤的水用無菌水,每周改易)。
c. 無菌操作臺內的airflow 壓力,定期改易太陽燈管及HEPA 過淋膜,預濾網(300鐘頭/預濾網,3000 鐘頭/HEPA)。 |