用分光光度計(jì)對被測物質(zhì)進(jìn)行測量時，儀器得到的直接結(jié)果是被測物質(zhì)對選定波長入射光的透射比。透射比是由每一被測物質(zhì)光譜特性決定的。 因此，它與波長檢定點(diǎn)的選擇、單射儀狹縫寬度及零點(diǎn)的調(diào)節(jié)、透射比準(zhǔn)確度及光譜帶寬影響有著直接，通常表現(xiàn)為以下幾種： 一、波長 波長對測量結(jié)果的影響程度與波長測定點(diǎn)在被測物品光譜曲線的位置及儀器波長誤差的大小有關(guān)。當(dāng)波長測量點(diǎn)位于被測樣品尖銳的吸收峰上或于較陡的斜坡上時，波長的較小偏移將會引起光度測量值的較大變動。 為此要得到相同的光譜強(qiáng)度，狹縫寬度要隨波長而改變。 如果狹縫是可變的或在移動和使用過程中，相對位置發(fā)生位移，狹縫引入誤差直接影響單色儀的波長準(zhǔn)確度分辨力。在單色儀入射狹縫和出射狹縫寬度為零的條件下分辨力zui大， 當(dāng)狹縫寬度增大時存在一些像差，分辨力則下降，從而影響測量的準(zhǔn)確度。 儀器波長的固有誤差對分光光度計(jì)測量準(zhǔn)確度也有一定的影響，它是儀器單位色系統(tǒng)與波長裝置在制造中的缺陷。 如儀器單位色系統(tǒng)色散元件、波長裝置中的刻線，傳動機(jī)構(gòu)在制造過程中不可避免存在著一定的加工誤差，就形成了該儀器固有的誤差。 這種誤差無法通過簡單的裝調(diào)來消除。 二、雜散輻射 用分光光度計(jì)對被測物質(zhì)進(jìn)行測量時，出射狹縫處存在雜散光能量，這些能量來自于儀器內(nèi)各元件的表面反射以及元件中的雜質(zhì)和缺陷產(chǎn)生的漫射。 其表現(xiàn)為：在選定波長處所接收的輻射中，夾雜有不屬于入射輻射光束通帶內(nèi)的輻射的光線，這種輻射光線未通過樣品而直達(dá)光電探測器上。 因此，雜散光輻射是引起分光光度分析法測量結(jié)果出現(xiàn)誤差的一項(xiàng)主要來源。 三、光譜帶寬 用分光光度計(jì)對被測物質(zhì)進(jìn)行測量時，入射狹縫相當(dāng)于一個輻射源，因而，入射狹縫的寬度和高度決定了入射光束的形狀和通量。 在實(shí)際使用中，總是使入射狹縫寬度與出射狹縫寬度相同， 當(dāng)縫的寬度發(fā)生變化時，出現(xiàn)在出射狹縫上的能量與縫寬變化平方成正比。狹縫越寬，則截取的波段越寬，因而出射狹縫的寬度決定了待測物品輻射的光譜帶寬，對于縫寬固定的儀器其影響較小，而對于狹縫可變的儀器則影響較大。例如：像干涉濾光片那樣的樣品，用帶寬較大的儀器測量帶寬較小的樣品，其峰值透射比要低，這樣將會給測量帶來一定的誤差。 四、透射比 透射比是分光光度計(jì)的一項(xiàng)綜合技術(shù)指標(biāo)，不僅與儀器光源的穩(wěn)定性、單色器性能、單色光的準(zhǔn)直度有關(guān)，探測系統(tǒng)變動性、照明光源的方向、測量的幾何條件、材料的表面狀態(tài)、光源輻射功率的分布、環(huán)境條件及入射光的偏振狀態(tài)等也都會引起透射比的隨機(jī)變化，特別是當(dāng)待檢物品測量時的測量條件與傳遞標(biāo)準(zhǔn)測量時的測量條件有差異時會引入較大的不確定度。 例如，當(dāng)入射光投射到某光滑介質(zhì)表面時，入射輻射能將其分解成垂直入射面和平行入射面，即波長的光行進(jìn)方向與原光線的方向偏折了一個角度， 輻射能由空氣進(jìn)入折射介質(zhì)時，透射比兩個分量隨入射角變化曲線而變化。 測量實(shí)踐證明：照明物品的光束與樣品法線夾角超過10°，光軸與照明光速的任一光線之間的夾角超過5°，透射光速直接進(jìn)入探測器造成測量誤差，偏向角越大，波長越短，折射率越大。 五、溶液酸度 溶液酸度對分光光度計(jì)的測量也有一定的影響。在不同的溶液酸度的條件下， 反應(yīng)的*程度也不一致，顯示出不同的顏色。由此可知，當(dāng)溶液酸度過大時，顯色劑離子的濃度減小，阻礙有色絡(luò)合物的形成。另一方面，當(dāng)溶液酸度太小時，顯色劑離子的濃度增大，會產(chǎn)生氫氧化物沉淀。所以，適當(dāng)選擇和控制好溶液酸度是非常有必要的，否則，會影響到分光光度計(jì)測量的靈敏度和重復(fù)性，造成一定的測量誤差。 |
