優(yōu)良的微生物實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范 在微生物實(shí)驗(yàn)室中，良好的實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范是基于很多原則，包括以下活動：無菌技術(shù)、培養(yǎng)基的控制、菌種的制備、儀器設(shè)備的管理、細(xì)致的記錄和數(shù)據(jù)的評估、人員的培訓(xùn)。*，微生物測定數(shù)據(jù)的可變性、可靠性和重現(xiàn)性是基于*方法的使用和堅(jiān)持良好的實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范。 培養(yǎng)基的制備和質(zhì)量控制－培養(yǎng)基的制備 培養(yǎng)基是微生物測定的基礎(chǔ)，培養(yǎng)基的質(zhì)量因而成了保證微生物實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。培養(yǎng)基的制備、合理的貯存、培養(yǎng)基的質(zhì)量檢驗(yàn)，能確保提供持續(xù)高質(zhì)量的培養(yǎng)基。在按照可接受的來源和標(biāo)準(zhǔn)中的配方制備培養(yǎng)基的過程中，重要的是選擇正確的培養(yǎng)基和成分。與脫水和制備好的培養(yǎng)基一起的還常常伴有供應(yīng)商的配方和說明。因?yàn)椴煌呐囵B(yǎng)基可能有不同的制備要求（如：加熱、填加物、 ph值的調(diào)節(jié)等），按照說明確保制備可接受的培養(yǎng)基是重要的。一份描述效期和建議貯存條件的COA是同制備好的培養(yǎng)基一起的，同時附有用于培養(yǎng)基的促生長試驗(yàn)和靈敏度測試的菌種。 水普遍用于微生物培養(yǎng)基的稀釋。純化水是zui常用的，但是在有些情況下，也用去離子水和蒸餾水。稀釋用水的體積應(yīng)該記錄。 使用脫水培養(yǎng)基和培養(yǎng)基組分來制備培養(yǎng)基時要準(zhǔn)確稱量。使用己校正的具有適合的稱量范圍的天平。使用清潔的容器和工具，防止配方中帶入外來物質(zhì)，改變培養(yǎng)基的zui終組成。稱量也應(yīng)該記錄。 脫水培養(yǎng)基先在水中分散，并*溶解和滅菌。如果必要可以加熱使溶解,但要防止過度加熱，因?yàn)樗械呐囵B(yǎng)基或多或少有對熱敏感的。用于培養(yǎng)基制備的設(shè)備應(yīng)適于加熱控制，持續(xù)攪拌，溶質(zhì)混合。培養(yǎng)基變黑（梅特拉反應(yīng)和非酶的棕色著色劑）通常顯示過度加熱。當(dāng)需要向培養(yǎng)基中添加補(bǔ)充物時，添加后應(yīng)充分混合。 制備好的培養(yǎng)基應(yīng)放在清潔無菌的玻璃器具中，也可以加入抑制性物質(zhì)。抑制性物質(zhì)可以由器具清潔時產(chǎn)生也可由先前貯存在此器具的物質(zhì)產(chǎn)生。必須確保清潔過程能有效去除殘留和異物，確保清潔劑用純化水充分清洗。參見《1051玻璃器具的清洗》。 培養(yǎng)基的滅菌應(yīng)根據(jù)供應(yīng)商提供的參數(shù)或用戶自己的驗(yàn)證。買來的制備好的培養(yǎng)基應(yīng)提供其使用的滅菌方法的文件。理想的供應(yīng)商應(yīng)提供培養(yǎng)基的滅菌保證水平（SAL），此水平是依靠*的生物指示劑確定的。濕熱高壓滅菌是的滅菌技術(shù)，除了一些為避免培養(yǎng)基中的熱敏物質(zhì)遭到破壞而采用的煮沸方法。通過過濾滅菌對有些配方也是合適的。 培養(yǎng)基的滅菌方法、滅菌條件的效果應(yīng)通過培養(yǎng)基的滅菌和促生長試驗(yàn)來驗(yàn)證。另外，如果通過濕熱滅菌，滅菌周期應(yīng)經(jīng)過驗(yàn)證，對選擇合適的負(fù)載和體積來確保合適的熱分布。通常供應(yīng)商建議采用一個已校正過的蒸汽高壓滅菌鍋器，在121°滅菌15分鐘。通常指培養(yǎng)基達(dá)到溫度的時間。當(dāng)滅菌鍋負(fù)載結(jié)構(gòu)影響加熱的速度是時，越多的負(fù)載就需要越長的滅菌周期。然而，滅菌的時間取決于培養(yǎng)基的體積和蒸汽高壓滅菌鍋的負(fù)載。滅菌周期中，當(dāng)溫度是慢慢上升時，可能導(dǎo)致培養(yǎng)基的過度加熱。因此，必須仔細(xì)確認(rèn)能達(dá)到zui小的SAL要求的滅菌周期，在過度加熱時，抑制培養(yǎng)基降解的趨勢。在流體循環(huán)完成后，不主張放冷后的培養(yǎng)基中放在滅菌鍋中貯存，因?yàn)檫@樣可能破壞培養(yǎng)基。不合適的加熱或滅菌（對買來的培養(yǎng)基或是內(nèi)部制備的培養(yǎng)基）可能導(dǎo)致顏色的不同變化，不透明，改變培養(yǎng)基的規(guī)格，或是PH發(fā)生漂移（與供應(yīng)商的提議范圍）。 通過無菌技術(shù)為測試制備的每一批培養(yǎng)基其PH在放冷至室溫（25°）后，都應(yīng)測定。一個扁平的pH計(jì)用于培養(yǎng)基表面pH值的測定，浸入式的pH計(jì)用于液體的測定。各供應(yīng)商提供的培養(yǎng)基的pH應(yīng)該在規(guī)定的±0.2的范圍內(nèi)，除非通過驗(yàn)證得到更寬的范圍。 |
