良好的微生物實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范USP藥典《1117》章節(jié) 簡介 在微生物實(shí)驗(yàn)室中，良好的實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范是基于很多原則，包括以下活動(dòng)：無菌技術(shù)、培養(yǎng)基的控制、菌種的制備、儀器設(shè)備的管理、細(xì)致的記錄和數(shù)據(jù)的評(píng)估、人員的培訓(xùn)。*，微生物測定數(shù)據(jù)的可變性、可靠性和重現(xiàn)性是基于*方法的使用和堅(jiān)持良好的實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范。 培養(yǎng)基的制備和質(zhì)量控制－培養(yǎng)基的制備 培養(yǎng)基是微生物測定的基礎(chǔ)，培養(yǎng)基的質(zhì)量因而成了保證微生物實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。培養(yǎng)基的制備、合理的貯存、培養(yǎng)基的質(zhì)量檢驗(yàn)，能確保提供持續(xù)高質(zhì)量的培養(yǎng)基。在按照可接受的來源和標(biāo)準(zhǔn)中的配方制備培養(yǎng)基的過程中，重要的是選擇正確的培養(yǎng)基和成分。與脫水和制備好的培養(yǎng)基一起的還常常伴有供應(yīng)商的配方和說明。因?yàn)椴煌呐囵B(yǎng)基可能有不同的制備要求（如：加熱、填加物、 ph值的調(diào)節(jié)等），按照說明確保制備可接受的培養(yǎng)基是重要的。一份描述效期和建議貯存條件的COA是同制備好的培養(yǎng)基一起的，同時(shí)附有用于培養(yǎng)基的促生長試驗(yàn)和靈敏度測試的菌種。 水普遍用于微生物培養(yǎng)基的稀釋。純化水是zui常用的，但是在有些情況下，也用去離子水和蒸餾水。稀釋用水的體積應(yīng)該記錄。 使用脫水培養(yǎng)基和培養(yǎng)基組分來制備培養(yǎng)基時(shí)要準(zhǔn)確稱量。使用己校正的具有適合的稱量范圍的天平。使用清潔的容器和工具，防止配方中帶入外來物質(zhì)，改變培養(yǎng)基的zui終組成。稱量也應(yīng)該記錄。 脫水培養(yǎng)基先在水中分散，并*溶解和滅菌。如果必要可以加熱使溶解,但要防止過度加熱，因?yàn)樗械呐囵B(yǎng)基或多或少有對熱敏感的。用于培養(yǎng)基制備的設(shè)備應(yīng)適于加熱控制，持續(xù)攪拌，溶質(zhì)混合。培養(yǎng)基變黑（梅特拉反應(yīng)和非酶的棕色著色劑）通常顯示過度加熱。當(dāng)需要向培養(yǎng)基中添加補(bǔ)充物時(shí)，添加后應(yīng)充分混合。 制備好的培養(yǎng)基應(yīng)放在清潔無菌的玻璃器具中，也可以加入抑制性物質(zhì)。抑制性物質(zhì)可以由器具清潔時(shí)產(chǎn)生也可由先前貯存在此器具的物質(zhì)產(chǎn)生。必須確保清潔過程能有效去除殘留和異物，確保清潔劑用純化水充分清洗。參見《1051玻璃器具的清洗》。 培養(yǎng)基的滅菌應(yīng)根據(jù)供應(yīng)商提供的參數(shù)或用戶自己的驗(yàn)證。買來的制備好的培養(yǎng)基應(yīng)提供其使用的滅菌方法的文件。理想的供應(yīng)商應(yīng)提供培養(yǎng)基的滅菌保證水平（SAL），此水平是依靠*的生物指示劑確定的。濕熱高壓滅菌是的滅菌技術(shù)，除了一些為避免培養(yǎng)基中的熱敏物質(zhì)遭到破壞而采用的煮沸方法。通過過濾滅菌對有些配方也是合適的。 培養(yǎng)基的滅菌方法、滅菌條件的效果應(yīng)通過培養(yǎng)基的滅菌和促生長試驗(yàn)來驗(yàn)證。另外，如果通過濕熱滅菌，滅菌周期應(yīng)經(jīng)過驗(yàn)證，對選擇合適的負(fù)載和體積來確保合適的熱分布。通常供應(yīng)商建議采用一個(gè)已校正過的滅菌高壓鍋，在121°滅菌15分鐘。通常指培養(yǎng)基達(dá)到溫度的時(shí)間。當(dāng)滅菌鍋負(fù)載結(jié)構(gòu)影響加熱的速度是時(shí)，越多的負(fù)載就需要越長的滅菌周期。然而，滅菌的時(shí)間取決于培養(yǎng)基的體積和高壓鍋的負(fù)載。滅菌周期中，當(dāng)溫度是慢慢上升時(shí)，可能導(dǎo)致培養(yǎng)基的過度加熱。因此，必須仔細(xì)確認(rèn)能達(dá)到zui小的SAL要求的滅菌周期，在過度加熱時(shí)，抑制培養(yǎng)基降解的趨勢。在流體循環(huán)完成后，不主張放冷后的培養(yǎng)基中放在滅菌鍋中貯存，因?yàn)檫@樣可能破壞培養(yǎng)基。不合適的加熱或滅菌（對買來的培養(yǎng)基或是內(nèi)部制備的培養(yǎng)基）可能導(dǎo)致顏色的不同變化，不透明，改變培養(yǎng)基的規(guī)格，或是PH發(fā)生漂移（與供應(yīng)商的提議范圍）。 通過無菌技術(shù)為測試制備的每一批培養(yǎng)基其PH在放冷至室溫（25°）后，都應(yīng)測定。一個(gè)扁平的pH計(jì)用于培養(yǎng)基表面pH值的測定，浸入式的pH計(jì)用于液體的測定。各供應(yīng)商提供的培養(yǎng)基的pH應(yīng)該在規(guī)定的±0.2的范圍內(nèi)，除非通過驗(yàn)證得到更寬的范圍。上海島韓實(shí)業(yè)有限公司是實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備的專業(yè)供應(yīng)商。上海培養(yǎng)箱，恒溫培養(yǎng)箱，生化培養(yǎng)箱 制備培養(yǎng)基應(yīng)對培養(yǎng)皿和試管進(jìn)行適當(dāng)如下的檢查： 有裂紋的容器和蓋子； 容器內(nèi)不同的填充體積； 有裂紋容器內(nèi)可導(dǎo)致脫水的結(jié)果或是固體培養(yǎng)基表面起皺； 溶血； 額外黑或顏色改變； 可能過冷引起的結(jié)晶； 過量的氣泡； 微生物的污染； 氧化顯示的情況； 批號(hào)、效期的檢查和記錄； 培養(yǎng)基的滅菌。 培養(yǎng)基的貯存 在培養(yǎng)基銷售給zui終的使用者之前，供應(yīng)商和生產(chǎn)商是如何運(yùn)輸和貯存培養(yǎng)基應(yīng)謹(jǐn)慎考慮。生產(chǎn)商在運(yùn)輸和貯存培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)使用那些能盡可能減少失水，溫度控制，機(jī)械保護(hù)裝置的條件。 培養(yǎng)基的標(biāo)識(shí)應(yīng)包括批號(hào)、制備，有效期和證書。培養(yǎng)基應(yīng)根據(jù)供應(yīng)商的說明書貯存。實(shí)驗(yàn)室制備的培養(yǎng)基應(yīng)根據(jù)驗(yàn)證的條件貯存。不能將培養(yǎng)基貯存在零度以下，因?yàn)樘涞臈l件下會(huì)破壞培養(yǎng)基的結(jié)構(gòu)。保護(hù)培養(yǎng)基避免在光照和過高的溫度下保存。培養(yǎng)基若要延長貯存，應(yīng)將培養(yǎng)皿放在密封包裝或容器中避免水分流失。 制備的固體培養(yǎng)基在初始容器中的再熔化，只能熔化一次，避免因過度加熱和潛在污染影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。推薦采用加熱水浴或蒸氣加熱來熔化培養(yǎng)基。微波爐和加熱板經(jīng)常使用，但是要小心，避免過度加熱破壞培養(yǎng)基，避免實(shí)驗(yàn)室人員受到玻璃的碎片和燒傷的危險(xiǎn)。熔化的培養(yǎng)基應(yīng)在45°至50°保存不超過8小時(shí)。當(dāng)從浸在水浴中的培養(yǎng)基容器中傾倒時(shí)，要小心操作防止水浴產(chǎn)生的水與己滅菌的培養(yǎng)基混合。在傾倒前將容器外表面擦干是明智的。 |
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